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Pronase E (Activity ≥ 4000 U/mg)品牌:MedChemExpress (MCE)
货号:HY-114158A
CAS:9036-06-0
Synonyms:Pronase (Activity ≥ 4000 U/mg)
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产品活性:Pronase E (Activity ≥ 4000 U/mg) 是从灰色链霉菌 (Streptomyces griseus) 中获得的一种蛋白水解酶混合物,能够将蛋白质消化成单个氨基酸。
生物活性: Pronase E(活性 ≥ 4000 U/mg)是从 Streptomyces griseus 中获得的蛋白水解酶的混合物,可以将蛋白质消化成单个氨基酸[1]。 体外:链霉蛋白酶 E 显着增加了所分析的大多数氨基酸(PE 与 C)的量,尤其是 Ile、His 和 Thr[1]晚饭>。
体外:Pronase E 显著增加了所分析的大多数氨基酸的量 (PE 与 C),尤其是 Ile、His 和 Thr[1]。 Pronase E 使用步骤:1. 储备液的制备: (1) 将 Pronase E 溶解于去离子水中,配制成 5-20 mg/ml 的储备液。 注:如用于 DNA 或 RNA 分离步骤,建议先将溶液在 56°C 下加热 15 分钟。(2) 在 37°C 下孵育 1 小时。将制备好的储备液分装为一次性等分试样,存储于 -20°C,通常可稳定保存一年。 2. DNA 分离: 直接将 Pronase E 添加到 DNA 制备系统中。制备系统应含有 0.5-1% 的 SDS,以破坏 DNA 与蛋白质的相互作用。注:使用浓度 250-500 μg 蛋白质/mL。孵育条件:37°C 下孵育 1-4 小时。 3. 蛋白质消化:(1) 将大约 0.2 μM 的蛋白质溶解在 0.2 ml 的 50 mM 碳酸氢铵缓冲液(pH 8.0)或磷酸盐缓冲液(pH 7.0)中。 (2) 添加 1%(w/w)的链霉蛋白酶 E。在 37°C 下孵育 24 小时,以进行蛋白质消化。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。
体内:使用 Pronase E 分离小鼠原代造血干细胞 (HSC) 的实验步骤[2]1. 动物麻醉与腹腔暴露:(1) 对雄性或雌性小鼠进行麻醉。(2) 在无菌操作下,通过腹腔切开术暴露肝脏。2. 肝脏灌注操作:(1) 使用 Hanks 缓冲盐溶液(HBSS)从门静脉对肝脏进行灌注,目的是清除血液和杂质。(2) 进行链霉蛋白酶 E 和胶原酶的酶促灌注,以解离肝脏组织。3. 肝脏提取与细胞释放:(1) 使用无菌镊子将肝脏从腹腔内轻柔取出,并迅速转移至无菌培养皿中。(2) 小心剥离肝包膜,通过温和的机械震荡促使细胞从肝组织中释放。4. 细胞消化与初步离心分离:(1) 将所得细胞悬浮于含有链霉蛋白酶 E、胶原酶及 DNase 的混合酶溶液中,并在 37°C 条件下消化 20 分钟。(2) 通过两次低速离心 (50 g,3 分钟) 分离肝细胞,收集细胞悬液。5. HSC 的分离与密度梯度离心:(1) 对细胞悬液进行进一步的离心处理(450 g,8 分钟),收集沉淀部分。(2) 将沉淀物重新悬浮于 18% 的 Nycodenz 溶液中,作为密度梯度分离的基础。(3) 构建密度梯度,依次为 12% Nycodenz、8.2% Nycodenz 以及 Gey 平衡盐溶液 (GBSS)。(4) 通过密度梯度离心,从 8.2% Nycodenz 层中分离并纯化造血干细胞 (HSC)。注:此方案提供了标准操作流程,实际实验中请根据具体实验需求和条件进行适当调整和优化。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。