本品系从牛胰腺、牛腮腺、牛肺脏中提取纯化制得的肽酶抑制剂。为白色或微黄色粉末。在水或生理盐水中易溶,在乙醇、丙酮或乙醚中不溶。无臭,有可透析性,等电点的pH值为10~10.5。对高温、酸和碱都很稳定。在稀酸中加热至100℃、pH12.6时室温放置24h仍很稳定,但在pH12.8时活力下降。在60~80℃时能被嗜热蛋白酶消化,对其他酶较为稳定。它本身不是酶,而是多肽,是酶的广谱抑制剂。含58个氨基酸,分子量约6500u。它能与多种蛋白酶的活动中心竞争一个赖氨酰基而抑制其活动。本品体内消除甚快,其血浆半衰期约150min。
可从牛肺、人尿中提取,国内主要从牛肺中提取取新鲜牛肺冲洗干净,用绞肉机绞碎。然后加入5倍体积的水,搅拌均匀,用2. 5mol/L的硫酸调节pH至2.O,搅拌提取8h,然后用双层纱布过滤,滤渣重复上述步骤再提取一次,合并二次提取液。向提取液中按每升277克加入硫酸铵,搅匀,再用5mol/L的硫酸调节pH为1.5,静置过夜。吸取上清液,过滤,滤液调节pH为5.5,再按每升加255克向滤液中加入硫酸铵,搅匀,静置48h,过滤,收集盐析物。盐析物用8~10倍水溶解,4℃下静置过夜,滤去沉淀,滤液中加入50%三氯乙酸(加量为滤液的1/20),搅匀,迅速加热至80℃后速冷到30℃,滤去沉淀,再用20%的氢氧化钠调pH为3.O,然后加入硫酸铵(每升滤液加610克),搅拌溶解,静置过夜,收集盐析物。盐析物再用5倍的0. Imol/L乙酸钠(pH5.5)缓冲液和1倍体积的硼酸缓冲液溶解,再加入硫酸镁(每升加1050克),搅拌溶解,静置过夜,收集沉淀,弃滤液。沉淀用4倍体积的水溶解后,透析24h,再加硅藻土过滤,滤液用201×7和001×7型树脂吸附(二者比例为3:1),过滤树脂,得脱盐液。脱盐液中加0.9%氯化钠和1.5倍丙酮析出沉淀,过滤。沉淀用丙酮和乙醚洗涤,干燥,然后再溶于倍量80%甲醇中,过滤。滤液中再加入适量的氯化钠和丙酮,搅匀,静置过夜,离心,沉淀用丙酮洗涤后,干燥,可得沉淀物。沉淀物用无热原的水溶解,调节pH为11,4℃下放置过夜,过滤,滤液用乙酸调节pH为4~5,再加入1%化钠溶液(浓度30%)及5倍量丙酮,静置过夜,收集沉淀,并用丙酮和乙醚洗涤,干燥,可得成品。
中文名 | 抑肽酶 |
英文名 | Trypsin inhibitor, pancreatic basic |
别名 | 抑肽酶 抑酶肽 屈里赛多 重组抑肽酶 蛋白酶抑制剂 抑肽酶(牛肺) 重组胰蛋白酶抑制剂 抗蛋白酶肽(牛肺) 抑肽酶(来源于牛肺,胰蛋白酶抑制剂) APROTININ 蛋白酶抑制剂(抑肽酶) |
英文别名 | TRASYLOL antikrein Aprotinin antilysin antilysine Trypsin Inhibitor Aprotinin,bovine lung aprotininfrombovinelung TRYPSIN INHIBITOR (BASIC) Aprotinin,recombinant E.coli TRYPSIN INHIBITOR, BOVINE LUNG TRYPSIN INHIBITOR, PANCREAS TYPE Recombinant aprotinin,from E.coli Trypsin inhibitor, pancreatic basic |
CAS | 9087-70-1 9004-04-0 |
EINECS | 232-994-9 |
化学式 | C284H432N84O78R2S7 |
分子量 | 6495.43988 |
熔点 | >234oC (dec.) |
水溶性 | Freely soluble in water and in aqueous buffers of low ionic strength. |
溶解度 | 甘油: 溶解3mg/mL,澄清,无色 (含有5% 甘油的平衡缓冲液) |
存储条件 | 2-8°C |
稳定性 | 稳定。与强氧化剂不相容。 |
外观 | 冻干粉 |
颜色 | white |
Merck | 13,761 |
物化性质 | 白色或米黄色干燥粉末。易溶于水、生理盐水,不溶于乙醇、丙酮、乙醚。 |
MDL号 | MFCD00162935 |
体外研究 | Aprotinin是一种抗纤维蛋白溶解的小分子,抑制胰蛋白酶和相关的蛋白水解酶。在细胞生物学中,aprotinin被用作蛋白酶抑制剂,在裂解、均化组织和细胞时,防止蛋白降解。Aprotinin以剂量依赖型的方式抑制纤维蛋白溶解活性,同时凝结时间延长。在体外,Aprotinin是一种有效地內源凝血途径抑制剂。 |
体内研究 | Aprotinin在体外抑制血块溶解,在体外延长大鼠剪尾出血时间,在人血浆中延长凝结时间。在大鼠动静脉短路模型中,aprotinin可减少血栓重量。 |
危险品标志 | Xn - 有害物品 Xi - 刺激性物品 |
风险术语 | R42/43 - 吸入及皮肤接触可能致敏。 R36/37/38 - 刺激眼睛、呼吸系统和皮肤。 R20/21/22 - 吸入、皮肤接触及吞食有害。 |
安全术语 | S22 - 切勿吸入粉尘。 S45 - 若发生事故或感不适,立即就医(可能的话,出示其标签)。 S36/37 - 穿戴适当的防护服和手套。 S36 - 穿戴适当的防护服。 S26 - 不慎与眼睛接触后,请立即用大量清水冲洗并征求医生意见。 |
WGK Germany | 1 |
RTECS | YN5080000 |
FLUKA BRAND F CODES | 10-21 |
海关编号 | 35040000 |
上游原料 | 醋酸 |
参考资料 展开查看 | 1. 张一帆, 王强, 王伟,等. 杨梅蛋白酶解肽抗氧化及降血糖活性的稳定性研究[J]. 食品工业科技, 2015, 36(014):86-91. 2. 吕娟 周刚 李振莲 杜艳 朱叶青.凝胶过滤色谱法测定蛋白胨中多肽的相对分子质量分布[J].食品安全质量检测学报 2020 11(15):5131-5136. 3. 金建, 马海乐, 曲文娟,等. 超声预处理对玉米蛋白可酶解性的影响[J]. 中国粮油学报, 2015, 30(11):58-64. 4. 吕娟,周刚,李振莲,杜艳,朱叶青.凝胶过滤色谱法测定蛋白胨中多肽的相对分子质量分布[J].食品安全质量检测学报,2020,11(15):5131-5136. 5. Tan, Chunye, et al. "Expression of MicroRNA-29a regulated by yes-associated protein modulates the neurite outgrowth in N2a cells." BioMed research international 2017 (2017).https://doi.org/10.1155/2017/5251236 6. [IF=5.118] Shan-Shan Zhang et al."Two Novel Multi-Functional Peptides from Meat and Visceral Mass of Marine Snail Neptunea arthritica cumingii and Their Activities In Vitro and In Vivo."Mar Drugs. 2018 Dec;16(12):473 7. [IF=7.514] Zhucheng Yin et al."Analysis of the interaction between cyanidin-3-O-glucoside and casein hydrolysates and its effect on the antioxidant ability of the complexes."Food Chem. 2021 Mar;340:127915 8. [IF=4.411] Yaru Wu et al."Interaction of Soy Protein Isolate Hydrolysates with Cyanidin-3-O-Glucoside and Its Effect on the In Vitro Antioxidant Capacity of the Complexes under Neutral Condition."Molecules. 2021 Jan;26(6):1721 9. [IF=2.696] He Zhang et al."Transdermal permeation effect of collagen hydrolysates of deer sinew on mouse skin, ex vitro, and antioxidant activity, increased type I collagen secretion of percutaneous proteins in NIH/3T3 cells."J Cosmet Dermatol-Us. 2020 Feb;19(2):519 10. [IF=5.396] Hongdong Song et al."Digestion characteristics of quinoa, barley and mungbean proteins and the effects of their simulated gastrointestinal digests on CCK secretion in enteroendocrine STC-1 cells."Food & Function. 2022 May;: 11. [IF=6.057] Supan Cheng et al."Liquid crystal-based sensitive and selective detection of uric acid and uricase in body fluids."Talanta. 2022 Jul;244:123455 |
本品系从牛胰腺、牛腮腺、牛肺脏中提取纯化制得的肽酶抑制剂。为白色或微黄色粉末。在水或生理盐水中易溶,在乙醇、丙酮或乙醚中不溶。无臭,有可透析性,等电点的pH值为10~10.5。对高温、酸和碱都很稳定。在稀酸中加热至100℃、pH12.6时室温放置24h仍很稳定,但在pH12.8时活力下降。在60~80℃时能被嗜热蛋白酶消化,对其他酶较为稳定。它本身不是酶,而是多肽,是酶的广谱抑制剂。含58个氨基酸,分子量约6500u。它能与多种蛋白酶的活动中心竞争一个赖氨酰基而抑制其活动。本品体内消除甚快,其血浆半衰期约150min。
可从牛肺、人尿中提取,国内主要从牛肺中提取取新鲜牛肺冲洗干净,用绞肉机绞碎。然后加入5倍体积的水,搅拌均匀,用2. 5mol/L的硫酸调节pH至2.O,搅拌提取8h,然后用双层纱布过滤,滤渣重复上述步骤再提取一次,合并二次提取液。向提取液中按每升277克加入硫酸铵,搅匀,再用5mol/L的硫酸调节pH为1.5,静置过夜。吸取上清液,过滤,滤液调节pH为5.5,再按每升加255克向滤液中加入硫酸铵,搅匀,静置48h,过滤,收集盐析物。盐析物用8~10倍水溶解,4℃下静置过夜,滤去沉淀,滤液中加入50%三氯乙酸(加量为滤液的1/20),搅匀,迅速加热至80℃后速冷到30℃,滤去沉淀,再用20%的氢氧化钠调pH为3.O,然后加入硫酸铵(每升滤液加610克),搅拌溶解,静置过夜,收集盐析物。盐析物再用5倍的0. Imol/L乙酸钠(pH5.5)缓冲液和1倍体积的硼酸缓冲液溶解,再加入硫酸镁(每升加1050克),搅拌溶解,静置过夜,收集沉淀,弃滤液。沉淀用4倍体积的水溶解后,透析24h,再加硅藻土过滤,滤液用201×7和001×7型树脂吸附(二者比例为3:1),过滤树脂,得脱盐液。脱盐液中加0.9%氯化钠和1.5倍丙酮析出沉淀,过滤。沉淀用丙酮和乙醚洗涤,干燥,然后再溶于倍量80%甲醇中,过滤。滤液中再加入适量的氯化钠和丙酮,搅匀,静置过夜,离心,沉淀用丙酮洗涤后,干燥,可得沉淀物。沉淀物用无热原的水溶解,调节pH为11,4℃下放置过夜,过滤,滤液用乙酸调节pH为4~5,再加入1%化钠溶液(浓度30%)及5倍量丙酮,静置过夜,收集沉淀,并用丙酮和乙醚洗涤,干燥,可得成品。
本品系自牛胰或牛肺中提取、纯化制得的具有抑制蛋白水解酶活性的多肽。按无水物计算,每lmg抑肽酶的活力不得少于3.0单位。
本品应从检疫合格的牛胰或肺中提取,生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。
取本品,精密称定,加水溶解并定量稀释制成每lml中含3.0单位的溶液,照紫外-可见分光光度法(通则0401)测定,在277nm的波长处有最大吸收,吸光度不得过0.8。
取本品,加水溶解并稀释制成每lml中含5mg的溶液,依法测定(通则0631),pH 值应为5.0〜7.0。
取本品,加水溶解并稀释制成每lml中含2mg的溶液,依法检査(通则0902第一法),溶液应澄清。
离分子蛋白质
取本品,加水溶解并稀释制成每lml中含5单位的溶液,作为供试品溶液;另取经112℃加热2小时处理过的抑肽酶适量,加水溶解并稀释制成每lml中含5单位的溶液,作为系统适用性溶液。照分子排阻色谱法(通则0514)测定,以亲水的改性硅胶为填充剂(TSK-G4000SWxl柱,7.8mmX30cm,8um或其他适宜的色谱柱),用3根色谱柱串联;以3mol/L醋酸溶液为流动相;流速为每分钟1.0ml;检测波长为280nm;柱温为35℃。取系统适用性溶液100u1,注人液相色谱仪,记录色谱图,二聚体峰相对抑肽酶峰的保留时间约为0.9 ;二聚体峰与抑肽酶峰间的分离度应大于1.0;抑肽酶主峰的拖尾因子不得大于2.5。取供试品溶液100u1,注人液相色谱仪,记录色谱图。保留时间小于抑肽酶主峰的均为髙分子蛋白质峰,按峰面积归一化法计算,高分子蛋白质的总量不得大于1.0% 。
取本品适量,加水溶解并稀释制成每lml中约含5单位的溶液,作为供试品溶液;另取抑肽酶对照品,加水溶解并稀释制成每lml中含5单位的溶液,作为对照品溶液。照毛细管电泳法(通则
0542)测定,采用熔融石英毛细管为分离柱(75umX 60cm,有效长度50cm);以120mmol/ L 磷酸二氢钾缓冲液(pH 2.5)为操作缓冲液;检测波长为214nm;毛细管温度为30°C;操作电压为12kV。去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的迁移时间为0.98,去丙氨酸-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的迁移时间为0.99;去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶峰和去丙氨酸-抑肽酶峰间的分离度应大于0.8,去丙氨酸-抑肽酶峰和抑肽酶峰间的分离度应大于0.5。抑肽酶峰的拖尾因子不得大于3。进样端为正极,1.5kPa压力进样,进样时间为3秒。每次进样前,依次用0.lmol/L氢氧化钠溶液、去离子水和操作缓冲液清洗毛细管柱2、2 和5分钟。供试品电泳谱图中,按公式lOO(r1\r2)计算,其中r1为去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶或去丙氨酸-抑肽酶的校正峰面积(峰面积/迁移时间),r2为去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶、去丙氨酸-抑肽酶与抑肽酶的校正峰面积总和。去丙氨酸-去甘氨酸_抑肽酶的量不得大于8.0%,去丙氨酸-抑肽酶的量不得大于7.5% 。
取本品适量,加流动相A溶解并稀释制成每lml中含5单位的溶液,作为供试品溶液;另取抑肽酶对照品,加流动相A 溶解并稀释制成每lml中含5单位的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法(通则0512)测定,采用阳离子色谱柱(TSK-GEL IC-Cation-SW柱,7.8mmX7.5cm,10um或其他适宜的色谱柱);以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾3.52g、磷酸氢二钠7.26g,加水1000ml使溶解)为流动相A ,以磷酸盐-硫酸铵缓冲液(取磷酸二氢钾3.52g、磷酸氢二钠7.26g、硫酸铵66.07g,加水1000ml使溶解)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;流速为每分钟1.0ml;检测波长为210nm;柱温为40°C。抑肽酶峰的保留时间约为17〜20分钟;N-焦谷氨酰-抑肽酶峰相对抑肽酶峰的保留时间为0.9; N-焦谷氨酰-抑肽酶峰与抑肽酶峰间的分离度应大于1.0;抑肽酶峰的拖尾因子应大于2.0。取供试品溶液40u1,注入液相色谱仪,记录色谱图。按峰面积归一化法计算,N-焦谷氨酰-抑肽酶的峰面积不得大于1.0% ;单个未知杂质的峰面积不得大于0.5% ,未知杂质的峰面积的和不得大于1.0% 。
取本品,照水分测定法(通则0832第一法1)测定,含水分不得过6.0% 。
取本品,加灭菌注射用水溶解并稀释制成每lml中含15单位的溶液,依法检查(通则1142),剂量按家兔体重每lkg注射1ml,应符合规定。
取本品,加氯化钠注射液溶解并稀释制成每lml中含4单位的溶液,依法检查(通则1141),应符合规定。
取本品,加氣化钠注射液溶解并稀释,依法检査(通则1145),剂量按猫体重每lkg注射1.5单位,应符合规定。
取苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐171.3mg,加水溶解并稀释至25ml。临用新制。
取胰蛋白酶对照品适量,精密称定,加盐酸滴定液(0.001mol/L)溶解并定量稀释制成每lml中约含0.8单位(每lml中约含lmg)的溶液,临用新制并置冰浴中。
精密量取胰蛋白酶溶液1ml,置20ml量瓶中,用硼砂-氯化钙缓冲液(pH 8.0)稀释至刻度,摇勻,放置10分钟,置冰浴中。
取本品适量,精密称定,加硼砂-氯化钙缓冲液(pH 8.0)溶解并定量稀释制成每lml中约含1.67单位(每lml中约含0.6mg)的溶液,精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml,置20ml量瓶中,再用硼砂-氯化钙缓冲液(pH 8.0)稀释至刻度,摇勻,反应10分钟,置冰浴中(2小时内使用)。
取硼砂-氯化钙缓冲液(pH 8.0)9.Oml与底物溶液1.Oml,置25ml烧杯中,于25°C±0.5°C 恒温水浴中放置3〜5分钟,在搅拌下滴加氢氧化钠滴定液(0.lmol/U调节pH值至8.0,精密加人供试品溶液(经25°C保温3〜5分钟)lml,并立即计时,用lml微量滴定管以氢氧化钠滴定液(O.lmol/L)滴定释放出的酸,使溶液的pH值始终保持在7.9〜8.1。每隔60秒读取pH值恰为8.0时所消耗的氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)的体积(ml),共6分钟。另精密量取胰蛋白酶稀释液lml,按上法操作,作为对照(重复一次)。以时间为横坐标,消耗的氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)为纵坐标作图,应为一条直线。供试品和对照两条直线应基本重合,求出每秒钟消耗氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)的体积(ml)。
能抑制一个胰蛋白酶单位[每秒钟能水解lumol的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE )为一个胰蛋白酶单位(nucrokatal)]的活力称为一个抑肽酶活力单位(EPU)。每1EPU的抑肽酶相当于1800KIU。
是测定对已知活性的胰蛋白酶的抑制作用。用胰蛋白酶原有活性与残存活性间的差值计算活力单位。
蛋白酶抑制药。
遮光,严封保存。
本品为抑肽酶的无菌冻干品。含抑肽酶的效价应为标示量的 85.0%〜120.0% 。
本品为白色或类白色冻干块状物或粉末。
取本品5支,分别精密加硼砂-氯化钙缓冲液(PH8.0)2ml溶解后合并,混勻。精密量取适量(约相当于含抑肽酶33.4单位),置20ml量瓶中,用硼砂-氯化钙缓冲液(pH8.0)稀释至刻度,摇匀,精密量取0.5ml与胰蛋白酶溶液2ml,置20ml量瓶中,用硼砂-氯化钙缓冲液(pH 8.0)稀释至刻度,摇匀,反应10分钟后,立即照抑肽酶项下的方法测定并计算。
同抑肽酶。
遮光,密闭,在阴凉处保存。
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