血管舒缓素
舒血管素(kallikrein from human plasma)
CAS: 9001-01-8
化学式:
性质
- 本品为由猪的颚下腺或胰脏中提取的一种有舒张血管作用的物质，为白色或灰白色粉末；易溶于水(10%)、稀醇、不溶于浓乙醇和一般有机溶剂，溶于水或生理盐水中成无色或微黄色的澄明溶液。对热、强酸、强碱、氧化剂均不稳定，pH 4.5～7.8时较稳定。
- 血管舒缓素是一种蛋白内切酶。它不同于其他酶，对酪蛋白和血红蛋白等常见蛋白底物不起作用，而专一性地作用于蛋白质底物激肽原而释放出激肽。它广泛存在于人或哺乳动物的组织和分泌物中，在胰腺、唾液腺、颌下腺、肠壁、十二指肠液和尿液中含量比较丰富。
- 猪胰激肽释放酶是一种糖蛋白，含有唾液酸，在腺体中以酶原形式存在。随着唾液酸含量的不同，可以得到l～5个组分，除去唾液酸并不影响酶的活性。常见的有A、B两种形式，分子量分别为28600、26800，均有两条肽链，N-末端是异亮氨酸和丙氨酸，c-末端是丝氨酸和脯氨酸。两者的氨基酸组成相同，都含229个氨基酸残基，但含糖量不同，A含糖5. 5%，B含糖11.5%。猪胰激肽释放酶的活性中心为丝氨酸和组氨酸；猪颌下腺激肽释放酶的分子量为32000，等电点为3. 9～4. 37。
- 激肽释放酶作用于激肽原后释放出激素物质激肽，组织激肽释放酶水解激肽原释放出胰激肽(10肽)，血液激肽释放酶则水解激肽原释放出舒缓激肽(9肽)。它能显著扩张血管，特别是扩张皮肤血管，也能扩张冠状动脉、肌肉、脑和腹部内脏血管，并能提高血管通透性，从而起到调节血液循环的作用。一般说来，纯度越高，稳定性越差。干燥粉末在-20保存数月活性不变。在pH=8的水及缓冲液中，可在冷冻状态保存相当时间不失活。巯基化合物及螯合剂如EDTA等可逆转金属离子对它的抑制。Ca2+、Mg2+对酶活性无影响、相反，高
浓度Ca2+ (lmol．L-1)可使酶活性增加15%～20%。某些胰蛋白酶抑制剂如抑肽酶、二异丙基磷酸等对胰及颌下腺激肽释放酶均有抑制作用。
制法
- 以猪颌下腺为原料的提取法。
- 以猪胰为原料的提取法。
将新鲜猪胰脏绞碎，用丙酮浸泡脱水，制成猪胰丙酮粉，然后加20倍量0.02m01／L醋酸，于10℃搅拌提取12h，离心，残渣加10倍量0.02m01／L醋酸再提取6h。提取液合并，然后加冷丙酮至浓度达33%，过滤，滤液再补加冷丙酮至70%，静置4h，离心，收集沉淀。沉淀再用丙酮和乙醚脱水、脱脂，真空干燥，得血管舒缓素粗品。向血管舒缓素粗品中加50倍量0.2%冷氯化钠溶液，用氨水调pH至8．O，搅拌溶解后过滤，滤液应澄清。将澄清滤液冷至2～3℃．再加冷丙酮使浓度达40%，冷室静置过夜，离心。离心清液补加丙酮至浓度为60%，静置4h，离心分出沉淀。沉淀用丙酮和乙醚洗涤，真空干燥，得血管舒素中间品。将中间品溶于0.001m01／L、pH4.5醋酸缓冲溶液中，离心去除沉淀。清液中加入钠型弱酸性阳离子树脂mnberliteCG50（树脂：中间品一50：1），搅拌吸附2h，吸附后的树脂用0.001m01／L、pH4.5缓冲液洗涤后，用2倍1m01／L、pH5．O氯化钠溶液搅拌洗脱1h，分离树脂。洗脱液透析脱盐，冻干，即得血管舒缓素。
用途
- 血管扩张药。用于脑动脉硬化、闭塞性动脉内膜炎、原发性高血压、心绞痛、闭塞性血管炎、四肢皮肤溃疡、肢端动脉痉挛、间歇性跛行症、冻疮、老年四肢厥冷、肢端知觉异常和中央视网膜炎及眼底出血等。
- 用法及剂量 肌肉注射，每次10～20u>每日1～3次。口服，每次4～8片，每日3次，空腹服。眼科亦可作眼结膜下注射，每次5u。
安全性
- 有面部潮红、眩晕、心悸。偶有过敏反应。颅内压增高、脑出血或其他出血倾向者禁用。恶性肿瘤及心脏扩大患者忌用。
- 遮光，密闭，在凉处保存。
| 中文名 | 舒血管素 |
| 英文名 | kallikrein from human plasma |
| 别名 | 舒血管素 血管舒缓素 胰激肽原酶 胰激肽释放酶 |
| 英文别名 | kalleone Kallikrein kininogenin Kallidinogenase Kallikrein, Human Urine Kallikrein, Human Plasma Kallikrein, Porcine Pancreas kallikrein from human plasma kallikrein from porcine pancreas |
| CAS | 9001-01-8 |
| EINECS | 232-574-5 |
| 存储条件 | 2-8°C |
| 外观 | 冻干粉 |
| 物化性质 | 化学性质 激肽释放酶是从猪的颚下腺或胰脏中提取的一种有舒张血管作用的物质。为白色或灰白色粉末；易溶于水（10%）、稀醇，不溶于浓乙醇和一般有机溶剂。溶于水或生理盐水后成无色或微黄色的澄明溶液。Ph4.5～7.8时较稳定。对热、强酸、强碱、氧化剂均不稳定。等电点为3.9～4.37。 |
| 产品用途 | 用途 用于生化研究，医药上用作血管扩张药，用于治疗脑动脉硬化、闭塞性动脉内膜炎、原发性高血压、心绞痛、闭塞性血管炎、四肢皮肤溃疡、冻疮等症状。 |
| MDL号 | MFCD00131428 |
| WGK Germany | 3 |
| RTECS | NZ2017050 |
| 上游原料 | 氢氧化铝 磷酸氢二铵 9-氨基吖啶 |
| 参考资料 展开查看 | 1. [IF=2.044] Chen Guo-Ying et al."Immobilized Kallikrein Microreactor Based on Capillary Electrophoresis for Online Enzyme Kinetics Analysis and Inhibitor Screening."Chromatographia. 2021 Oct 11 |
血管舒缓素 - 性质
可信数据
- 本品为由猪的颚下腺或胰脏中提取的一种有舒张血管作用的物质，为白色或灰白色粉末；易溶于水(10%)、稀醇、不溶于浓乙醇和一般有机溶剂，溶于水或生理盐水中成无色或微黄色的澄明溶液。对热、强酸、强碱、氧化剂均不稳定，pH 4.5～7.8时较稳定。
- 血管舒缓素是一种蛋白内切酶。它不同于其他酶，对酪蛋白和血红蛋白等常见蛋白底物不起作用，而专一性地作用于蛋白质底物激肽原而释放出激肽。它广泛存在于人或哺乳动物的组织和分泌物中，在胰腺、唾液腺、颌下腺、肠壁、十二指肠液和尿液中含量比较丰富。
- 猪胰激肽释放酶是一种糖蛋白，含有唾液酸，在腺体中以酶原形式存在。随着唾液酸含量的不同，可以得到l～5个组分，除去唾液酸并不影响酶的活性。常见的有A、B两种形式，分子量分别为28600、26800，均有两条肽链，N-末端是异亮氨酸和丙氨酸，c-末端是丝氨酸和脯氨酸。两者的氨基酸组成相同，都含229个氨基酸残基，但含糖量不同，A含糖5. 5%，B含糖11.5%。猪胰激肽释放酶的活性中心为丝氨酸和组氨酸；猪颌下腺激肽释放酶的分子量为32000，等电点为3. 9～4. 37。
- 激肽释放酶作用于激肽原后释放出激素物质激肽，组织激肽释放酶水解激肽原释放出胰激肽(10肽)，血液激肽释放酶则水解激肽原释放出舒缓激肽(9肽)。它能显著扩张血管，特别是扩张皮肤血管，也能扩张冠状动脉、肌肉、脑和腹部内脏血管，并能提高血管通透性，从而起到调节血液循环的作用。一般说来，纯度越高，稳定性越差。干燥粉末在-20保存数月活性不变。在pH=8的水及缓冲液中，可在冷冻状态保存相当时间不失活。巯基化合物及螯合剂如EDTA等可逆转金属离子对它的抑制。Ca2+、Mg2+对酶活性无影响、相反，高
浓度Ca2+ (lmol．L-1)可使酶活性增加15%～20%。某些胰蛋白酶抑制剂如抑肽酶、二异丙基磷酸等对胰及颌下腺激肽释放酶均有抑制作用。
最后更新：2024-01-02 23:10:35
血管舒缓素 - 制法
可信数据
- 以猪颌下腺为原料的提取法。
- 以猪胰为原料的提取法。
将新鲜猪胰脏绞碎，用丙酮浸泡脱水，制成猪胰丙酮粉，然后加20倍量0.02m01／L醋酸，于10℃搅拌提取12h，离心，残渣加10倍量0.02m01／L醋酸再提取6h。提取液合并，然后加冷丙酮至浓度达33%，过滤，滤液再补加冷丙酮至70%，静置4h，离心，收集沉淀。沉淀再用丙酮和乙醚脱水、脱脂，真空干燥，得血管舒缓素粗品。向血管舒缓素粗品中加50倍量0.2%冷氯化钠溶液，用氨水调pH至8．O，搅拌溶解后过滤，滤液应澄清。将澄清滤液冷至2～3℃．再加冷丙酮使浓度达40%，冷室静置过夜，离心。离心清液补加丙酮至浓度为60%，静置4h，离心分出沉淀。沉淀用丙酮和乙醚洗涤，真空干燥，得血管舒素中间品。将中间品溶于0.001m01／L、pH4.5醋酸缓冲溶液中，离心去除沉淀。清液中加入钠型弱酸性阳离子树脂mnberliteCG50（树脂：中间品一50：1），搅拌吸附2h，吸附后的树脂用0.001m01／L、pH4.5缓冲液洗涤后，用2倍1m01／L、pH5．O氯化钠溶液搅拌洗脱1h，分离树脂。洗脱液透析脱盐，冻干，即得血管舒缓素。
最后更新：2022-01-01 11:11:07
血管舒缓素 - 标准
可信数据
本品系自猪胰中提取的蛋白酶。每lmg蛋白含胰激肽原酶的活力不得少于300单位（供口服用）或600单位（供注射用）。
最后更新：2024-01-02 23:10:35
血管舒缓素 - 性状
可信数据
- 本品为白色或类白色粉末;无臭。
- 本品在水中易溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。
最后更新：2022-01-01 15:38:20
血管舒缓素 - 介绍
酶活定义：One unit will hydrolyze 1.0 μmole of Nα-benzoyl-L-arginine ethyl ester (BAEE) to Nα-benzoyl-L-arginine and ethanol per min at pH 8.7 at 25°C.
最后更新：2022-10-16 17:29:43
血管舒缓素 - 用途
可信数据
- 血管扩张药。用于脑动脉硬化、闭塞性动脉内膜炎、原发性高血压、心绞痛、闭塞性血管炎、四肢皮肤溃疡、肢端动脉痉挛、间歇性跛行症、冻疮、老年四肢厥冷、肢端知觉异常和中央视网膜炎及眼底出血等。
- 用法及剂量 肌肉注射，每次10～20u>每日1～3次。口服，每次4～8片，每日3次，空腹服。眼科亦可作眼结膜下注射，每次5u。
最后更新：2022-01-01 11:11:08
血管舒缓素 - 鉴别
可信数据
- 取已测得效价的本品适量，精密称定，加纯度项下的磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释制成每lml中含10单位的溶液。精密量取4ml，置10ml量瓶中，用上述缓冲液稀释至刻度，作为供试品溶液。取效价测定项下的底物溶液2.9ml，在30°C ±0.5°C预热5分钟，置1cm比色池中，精密加入供试品溶液0.1ml，混匀，立即计时，使比色池内的温度保持在30°C±0.5°C，照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在253nm的波长处测定，以纯度项下的磷酸盐缓冲液0.1ml代替供试品溶液，同法操作，作为空白对照。
- 在纯度项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
最后更新：2022-01-01 15:38:21
血管舒缓素 - 安全性
可信数据
- 有面部潮红、眩晕、心悸。偶有过敏反应。颅内压增高、脑出血或其他出血倾向者禁用。恶性肿瘤及心脏扩大患者忌用。
- 遮光，密闭，在凉处保存。
最后更新：2022-01-01 11:11:08
血管舒缓素 - 检查
可信数据
酸碱度
取本品适量，加水溶解并稀释制成每lml中含300单位的溶液，依法测定（通则0631)，pH 值应为5.5〜7.5。
溶液的澄清度
取本品适量，加水溶解并稀释制成每lml中含2mg的溶液，依法检查（通则0902第一法），溶液应澄清。（供注射用）
脂肪
取本品1.0g，置具塞锥形瓶中，加乙醚20ml，密塞，时时旋动，放置约30分钟后，将乙醚液倾至用乙醚润湿的滤纸上，滤过，再用乙醚10ml洗涤残渣，合并滤液及洗液至已恒重的蒸发皿中，除去乙醚，在105°C干燥2小时，精密称定，遗留脂肪不得过5mg。
纯度
取本品适量，加流动相A 溶解并稀释制成每lml中约含200单位的溶液，作为供试品溶液；另取胰激肽原酶对照品（纯度应大于95%)适量，同法制成每lml中约含200单位的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（通则0512)试验，用疏水性凝胶为填充剂（TSKgel Phenyl-5PW,7.5mmX75mm，10um或其他适宜的色谱柱以含1.7mol/L硫酸铵的磷酸盐缓冲液（pH 7.0 )(取磷酸氢二钠10.9g，磷酸二氢钠2.3g，加水溶解并稀释至1000ml，用50%磷酸溶液调节pH值至7.0 )为流动相A ，以上述磷酸盐缓冲液（pH 7.0)为流动相B ;柱温为25°C ;流速为每分钟0.5ml;检测波长为280nm。按下表进行梯度洗脱。理论板数按胰激肽原酶峰计算不低于1500，胰激肽原酶主峰与相邻杂质峰之间的分离度不得低于0.8。取流动相A 、供试品溶液及对照品溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。将供试品溶液和对照品溶液的色谱图扣除流动相A 色谱图（作为空白基线），进行基线校正。在供试品溶液色谱图中，量取空白基线拐点（约16分钟）后所有色谱峰面积，按面积归一化法计算，与对照品溶液主峰保留时间一致的主峰面积不得低于75%(供口服用）或90%(供注射用）。
干燥失重
取本品0.5g ,以五氧化二磷为干燥剂，在60°C减压干燥4小时，减失重量不得过5.0%(通则0831) 。
炽灼残渣
取本品0.5g，依法检查（通则0841) ，遗留残渣不得过3.0%。
细菌内毒素
取本品，依法检查（通则1143) ，每1单位胰激肽原酶中含内毒素的量应小于2.5EU。（供注射用）
最后更新：2022-01-01 15:38:22
血管舒缓素 - 效价测定
可信数据
酶活力标准品溶液的制备
取胰激肽原酶标准品，按标示单位，加纯度项下的磷酸盐缓冲液(pH 7.0)适量使溶解并定量稀释制成每lml中含10单位的溶液。供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，加上述磷酸盐缓冲液(pH 7.0)适量使溶解并定量稀释制成每lml中约含10单位的溶液。
底物溶液的制备
取外苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐17.7mg，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(称取三羟甲基氨基甲烷12.14g，加水800ml溶解，用6mol/L盐酸溶液调节pH 值至8.0，用水稀释至1000ml)适量使溶解并稀释至100ml，4°C保存。
蛋白含量
取本品约10mg精密称定，照蛋白质含量测定法（通则0731第一法）测定，即得。
比活
由测得的酶活力和蛋白含量计算每lmg蛋白中含胰激肽原酶的单位数，即得。
最后更新：2022-01-01 15:38:23
血管舒缓素 - 类别
可信数据
血管舒张药。
最后更新：2022-01-01 15:38:23
血管舒缓素 - 贮藏
可信数据
遮光，密封，在阴凉干燥处保存。
最后更新：2022-01-01 15:38:23
血管舒缓素 - 制法要求
可信数据
本品应从检疫合格的猪胰中提取，生产过程应符合现行版《药品生产质量管理规范》的要求。供注射用的本品在生产过程中应采用适宜的病毒灭活工艺。
最后更新：2022-01-01 15:38:23
血管舒缓素 - 胰激肽原酶肠溶片
可信数据
本品含胰激肽原酶的效价应不小于标示量的85.0%。
性状
本品为肠溶衣片，除去包衣后显白色或类白色。
鉴别
在纯度项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
检查
- 纯度 取本品5除去包衣，研细，称取细粉适量，置离心管中，加流动相A适量使胰激肽原酶溶解并稀释制成每lml中约含胰激肽原酶200单位的溶液，在漩涡振荡器上混匀2分钟，离心（每分钟3000转）15分钟，取上清液滤过5取续滤液作为供试品溶液;取淀粉1.3g、糊精0.36g与微晶纤维素0.52g，置离心管中，加流动相A3ml，同法操作，取续滤液作为辅料溶液;取胰激肽原酶对照品（纯度应大于95%)适量，加流动相A 溶解并稀释制成每lml中约含400单位的溶液，作为对照品溶液；取等体积的辅料溶液与对照品溶液，混匀，作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（通则0512)试验，用疏水性凝胶为填充剂（TSKgel Phenyl-5PW，7.5mm X75mm, 10um或其他适宜的色谱柱）；以含1.7mol/L硫酸铵的磷酸盐缓冲液(pH 7.0 )(取磷酸氢二钠10.9g，磷酸二氢钠2.3g，加水溶解并稀释至1000ml，用50%磷酸溶液调节pH值至7.0)溶液为流动相A ，以上述磷酸盐缓冲液（pH 7.0)为流动相柱温为25°C;流速为每分钟0.5ml;检测波长为280nm。按下表进行线性梯度洗脱。取流动相A 与系统适用性溶液各20ul，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。将系统适用性溶液的色谱图扣除流动相A 的色谱图（作为空白基线），进行基线校正。辅料杂质峰的保留时间约为36分钟，胰激肽原酶峰的保留时间约为46分钟。理论板数按胰激肽原酶峰计算不低于1500，胰激肽原酶峰与辅料杂质峰的分离度应大于3.0。精密量取供试品溶液与对照品溶液各20ul，分别注人液相色谱仪，记录色谱图，并按上述方法同法进行基线校正。在供试品溶液色谱图中，量取辅料杂质峰后各色谱峰的面积，按峰面积归一化法计算，与对照品溶液主峰保留时间一致的主峰面积不得低于70%。
- 含量均匀度 取本品10片，除去包衣5研细，分别加纯度项下的磷酸盐缓冲液（pH 7.0)适量，研磨使胰激肽原酶溶解，并定量稀释成每lml中含胰激肽原酶10单位的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照胰激肽原酶的效价测定项下的方法测定，每片效价与10片的平均效价比较，大于平均效价±10%的不得多于1片，且不得超过士 15%;10片效价的相对标准偏差应不得大于6.0%。
- 溶出度 取本品，照溶出度与释放度测定法（通则0931，采用第一法和第二法中肠溶制剂方法2，仪器装置采用第三法），以0.lmol/L盐酸溶液100ml为溶出介质，转速为每分钟75转，依法操作，经1小时时，片剂应不得有裂缝、崩解现象。弃去各溶出杯中酸液，快速用水冲洗数次，立即加人与酸液相同温度的磷酸盐缓冲液（pH 6.8)100ml，继续依法操作，经45分钟时，取溶液约10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液；另取胰激肽原酶标准品适量，按标示单位加上述磷酸盐缓冲液(pH 6.8)溶解并定量稀释制成每lml中约含0.5 单位（60单位规格）或1单位（120单位规格）或2单位（240单位规格）的溶液，作为标准品溶液。取小试管2支，各加三羟甲基氨基甲烷缓冲液（称取三羟甲基氨基甲烷12.14g5加水800ml溶解，用6mol/L盐酸溶液调节pH 值至8.0，加水稀释至1000ml)2.Oml底物溶液（取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐14.14mg;(加三羟甲基氨基甲烷缓冲液12.5ml溶解，4°C保存)0.5ml，混勻，置25°C±0.5°C水浴中保温数分钟后，一支试管中精密加人供试品溶液0.2ml，混勻，立即计时，使比色池内的温度保持在25°C 士0.5°C，另一支试管中精密加入磷酸盐缓冲液（pH 6.8)0.2ml代替供试品溶液，作为空白，计时至1分钟时，照紫外-可见分光光度法（通则0401)，在253mn的波长处测定吸光度(A1) ，再将上述两种溶液倒回对应的试管中，继续置25°C±0.5°C水浴中保温，至16分钟时同法测定吸光度(A2) 。另取标准品溶液同法操作。
- 其他 应符合片剂项下有关的各项规定(通则0101) 。
效价测定
取本品20片，除去包衣，精密称定，研细。精密称取细粉适量（约相当于胰激肽原酶250单位置研钵中，加少量纯度项下的磷酸盐缓冲液（pH 7.0) ，研磨使胰激肽原酶溶解，定量转移至25ml量瓶中，用上述磷酸盐缓冲液(pH 7.0)稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，照胰激肽原酶项下的方法测定，即得
类别
同胰激肽原酶。
规格
（1)60单位（2)120单位（3)240单位
贮藏
密封，在阴凉干燥处保存。
最后更新：2022-01-01 15:38:25
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